Генетическая инженерия растений. Области применения генной инженерии растений Генная инженерия в системе защиты растений

1 В 1972 г. Пол Берг с сотрудниками опубликовали первую работу о получении in vitro (вне организма) рекомбинантной (гибридной) молекулы ДНК, состоящей из фрагментов фаговой, бактериальной и вирусной ДНК. Так родилась новая отрасль молекулярной биологии, получившая название «генетическая (генная) инженерия». Своей целью она имеет создание новых генетических структур и, в конечном счете, создание организмов с новыми наследственными свойствами.

В том же году появилась первая публикация, в которой сообщалось о получении in vitro рекомбинантной ДНК, состоящей из фрагментов разных молекул ДНК: вирусной, бактериальной и фаговой. Работа была выполнена американским ученым Полем Бергом с сотрудниками и ознаменовала рождение новой отрасли молекулярной биологии генетической (генной) инженерии.

А.А. Баев был первым в нашей стране ученым, который поверил в перспективность генной инженерии и возглавил исследования в этой области. Генетическая (генная) инженерия, по его определению, это конструирование in vitro функционально активных генетических структур (рекомбинантных ДНК), или создание искусственных генетических программ. Генная инженерия имеет целью изучение механизмов функционирования генетического аппарата.

Интроны – это участки ДНК, разбивающие экспрессируемую, то есть кодирующую часть гена на участки, называемые экзонами. Впервые феномен существования прерывистых генов был открыт при изучении аденовируса и подтвердился в 1977 г. при исследовании гена глобина мыши и рибосомных генов плодовой мушки Drosophilla melanogaster. В одном гене может находиться довольно много интронов.

В процессе транскрипции РНК-полимераза снимает копию со всего гена. Затем специальные сплайсинг-ферменты осуществляют «монтаж» (сплайсинг) транскрипта, вырезают интроны и «склеивают» экзоны друг с другом. В результате чего образуется зрелая, но еще модифицированная мРНК.

Рисунок 13. Сегмент генома в процессе транскрипции

Эукариот, включая человека, что другими приемами сделать невозможно. Вместе с тем, генная инженерия ставит перед собой обширные практические задачи, немало из которых уже решено. Прежде всего это получение путем бактериального синтеза ряда лекарственных средств, например, инсулина, интерферонов. Важнейшим достижением является создание диагностических препаратов. Получение так называемых трансгенных растений открывает принципиально новые возможности для растениеводства в создании сельскохозяйственных культур, устойчивых к экстремальным воздействиям и инфекционным поражениям. Это далеко не полный перечень практических свершений генной инженерии.

После первых успешных экспериментов с рекомбинацией молекул ДНК в пробирке появились первые сомнения и опасения, не принесет ли генная инженерия вред природе и человечеству. В июле 1974 года несколько крупных ученых обратились к научной общественности с предложением наложить мораторий на работы с рекомбинантными ДНК in vitro. В феврале 1975 года в Калифорнии на Асиломарской конференции собрались 140 ученых разных стран, работающих в области генной инженерии. Всесторонне изучив результаты и возможные последствия, ученые пришли к выводу, что потенциальные опасности невелики, так как рекомбинантные штаммы в природных условиях нежизнеспособны и их бесконтрольное распространение маловероятно. Было решено


прервать мораторий и продолжить исследования с соблюдением специально разработанных правил. Сегодня мы можем отметить, что почти за четверть века своего существования генная инженерия не причинила никакого вреда самим исследователям, не принесла ущерба ни природе, ни человеку. Свершения генной инженерии как в познании механизмов функционирования организмов, так и в прикладном плане весьма внушительны, а перспективы поистине фантастичны.

Молекулярная биология заявила о себе в качестве самостоятельной науки в 1953 году, когда Джеймс Уотсон и Френсис Крик открыли знаменитую двойную спираль ДНК и постулировали матричный механизм ее синтеза.

В соответствии с этим механизмом двойная спираль ДНК при репликации разделяется и каждая цепь служит матрицей для синтеза дочерней цепи, которая по своей первичной структуре является зеркальным отражением матрицы (рис. 14). В результате такого матричного синтеза образуются две совершенно идентичные двуспиральные молекулы ДНК, каждая из которых передается в дочерние клетки. Последние получают всю генетическую программу от родительской клетки. По такому же матричному механизму осуществляется синтез РНК, только РНК синтезируется в виде односпиральной цепи, которая комплементарна ДНК – матрице.

Рисунок 14. Транскрипция ДНК

Этот процесс получил название транскрипции. А процесс и синтеза белка на РНК-матрице (м-РНК) происходит на рибосомах, и структура белка соответствует структуре м-РНК. Это очень сложный процесс, он называется трансляцией (рис. 14), и в нем участвует транспортная РНК (т-РНК). Она доставляет в рибосому аминоксилоты и адаптирует язык м-РНК к языку белка. Таким образом, процесс матричного синтеза ДНК определяет передачу наследственной информации от родительской клетки в дочернюю. В процессе матричного синтеза РНК происходит передача информации (генетического кода данного белка)от ДНК на м-РНК, а м-РНК переносит информацию на рибосому, где она реализуется в виде конкретной структуры белка.

При половом процессе может происходить обмен участками между двумя хромосомами (молекулами ДНК) от двух скрещиваемых индивидуумов. Этот процесс получил название рекомбинация, и в клетке чаще всего он может происходить только между гомологичными хромосомами, так как комплементарные по своей структуре молекулы ДНК притягиваются друг к другу и обмениваются генетическими детерминантами, в результате чего образуется дочерняя хромосома, содержащая элементы структуры от двух родительских хромосом. Открытый недавно процесс негомологичной рекомбинации осуществляется только в том случае, если в одной из взаимодействующих молекул ДНК есть гены, кодирующие специальные ферменты разрезания ДНК.

Рисунок 15. Схема организации хромосомного материала

Следующее важное открытие, предопределившее возникновение генной инженерии, обнаружение в бактериальных клетках внехромосомных маленьких кольцевых молекул ДНК. Эти минихромосомы впервые были обнаружены в начале 50-х годов и получили название плазмид. Плазмиды обладают способностью к автономной от хромосомы репликации, поэтому плазмиды содрежатся в клетке в виде нескольких копий. Различаются плазмиды по генетическим детерминантам. Очень важно, что плазмиды из-за своих малых размеров могут быть выделены из клетки в неповрежденном, нативном состоянии.

В 1970 году американцы Келли и Смит с сотрудниками выделили первую рестриктазу фермент, который вызывает гидролиз ДНК в строго определенных местах с образованием так называемых липких концов. Существование таких ферментов-рестриктаз было доказано в опытах швейцарцев Линна и Арбера в конце 60-х годов. В настоящее время описано множество таких ферментов, которые применяются в генной инженерии.

Таким образом, к началу 70-х годов были сформулированы основные принципы функционирования нуклеиновых кислот и белков в живом организме и созданы теоретические предпосылки генной инженерии.

2 Как уже указывалось, процесс рекомбинации в организме (in vivo) возможен в большинстве случаев между гомологичными молекулами ДНК. Однако оказалось, что in vitro притягивание и взаимодействие (гибридизация) молекул ДНК возможно, если они будут иметь небольшие комплементарные односпиральные участки из четырех и более нуклеотидов на концах молекул (в настоящее время описаны двенадцатинуклеотидные липкие концы). Такие комплементарные односпиральные последовательности получили название липких концов, так как две молекулы ДНК могут соединиться (слипнуться) этими концами. Таким образом, если в пробирку поместить самые разные молекулы ДНК с одинаковыми липкими концами, то будет происходить рекомбинация, даже если вся их структура очень различается.

Как же получить гетерогенные молекулы ДНК с одинаковыми липкими концами? Для этого используются ферменты-рестриктазы, которые «умеют» разрезать молекулы ДНК так, что у них образуются одинаковые (комплементарные) липкие концы. Происходит такое разрезание в участках, несущих особым образом повторяющиеся последовательности нуклеотидов. Рестриктазы узнают эти последовательности и разрезают ДНК в точках повтора: в результате односпиральный конец одной молекулы оказывается комплементарным (липким) концу другой молекулы.

Теперь, чтобы полученные в пробирке генные конструкции заработали, необходимо их ввести в подходящую бактериальную клетку. Вот тут –то и пригодятся плазмиды. В генной инженерии их называют векторами (повозки, которые доставляют в клетку клонируемый ген). Для этого плазмиды тоже режут рестриктазами, чтобы получить односпиральные концы, комплементраные концам генов, проводят гибридизацию гена и плазмиды в пробирке, а затем рекомбинантную плазмиду (ее называют еще химерной) вводят в клетку. Плазмиды, которые используются в генной инженерии, имеют очень важное свойство: они содержат так называемый маркерный ген, например ген, сообщающий клетке устойчивость к определенному антибиотику. Благодаря этому клетки, несущие рекомбинантную плазмиду, легко отделить от клеток, не имеющих такой плазмиды. Для этого бактерии высевают на среду с антибиотиком, на которой будут расти только клетки с плазмидой – так называемые рекомбинантные клетки, а процедура их отбора получила название молекулярного клонирования, так как рекомбинантные клетки представляют собой потомство одной молекулы ДНК.

В рекомбинантных клетках химерная плазмида, несущая чужеродный ген, начинает функционировать, то есть совершаются процессы репликации, транскрипции и трансляции нового введенного в клетку гена и синтезируется продукт этого гена, который в природных клетках никогда ранее не мог образоваться. Таким образом, in vitro проводится только рекомбинация, а все остальные превращения с химерной плазмидой происходят в клетке так же, как и со своими собственными генами. Иными словами, теперь можно ввести в бактериальную клетку ген, полученный из любого организма, и заставить чужеродный ген там функционировать.

Итак, основные процедуры в генной инженерии сводятся к следующему (рис. 16):

1) рекомбинация in vitro ДНК-вектора и ДНК – гена;

2) введение рекомбинантной плазмиды в клетку;

3) молекулярное клонирование.

Рисунок 16. Принципиальная схема манипуляции генной инженерии

5596 0

Метаболическая инженерия растений направлена на проведение трансгенной клеткой новых биохимических реакций путем введения чужеродных генов или модификацией генов клетки-хозяина. Растения представляют один из наиболее привлекательных объектов для метаболической инженерии. Имея одинаковые пути синтеза основных биологических соединений, растения отличаются поразительным разнообразием своих конечных продуктов: сахаров, ароматических соединений, жирных кислот, стероидных соединений и других биологически активных веществ. Растения дают человечеству десятки тысяч природных продуктов, многие из которых представляют большую ценность для фармакологии и промышленности.

Иногда такими продуцентами важных лекарственных веществ являются уникальные тропические и эндемические растения, недоступные для их агротехнического производства в умеренных климатических зонах большинства развитых стран мира. Выделение из таких растений генов, определяющих направленный синтез специфических органических соединений, и их перенос в подобранные соответствующие растения превращают их в новые продуценты важных биологически активных веществ.

Многие растения содержат предшественников биосинтеза ценных биологических соединений, однако они не имеют ферментов для их превращений в эти соединения. Часто для метаболической инженерии достаточно переноса в клетку только одного гена. Примером такого типа метаболической инженерии является получение новых растений-продуцентов резвератрола, ценного лекарственного препарата широкого спектра действия, замедляющего старение. Резвератрол был обнаружен в винограде, где фермент стилбенсинтаза катализирует реакцию синтеза резвератрола из трех молекул малонил-СоА и одной молекулы 4-кумарил-СоА (рис. 2.15). Переносом гена стилбенсинтазы были получены другие растения, синтезирующие резвератрол.


Рис. 2.15. Схема синтез резвератрола, найденного в винограде ценного препарата антиоксидантного типа с широким спектром действия. Исходные соединения присутствуют в клетках любых растений


Создание растений с улучшенными лечебно-диетическими свойствами поможет улучшить пищевую ценность растений. Ранее было практически невозможно с помощью селекции вывести растения с повышенным содержанием витаминов. Однако с развитием биохимии растений стало более ясным, какие метаболические пути являются критическими для биосинтеза витаминов. Например, для синтезав -каротина (провитамина А) в растениях необходима фитоен-синтетаза.

Этот фермент участвует в конденсации двух молекул геранил-геранил дифосфата. Ген фитоен-синтетазы из нарцисса был введен в рис и экспрессирован в эндосперме риса. Таким образом, получен «золотой рис», который может помочь 2 млрд чел., страдающих от дефицита витамина А, для них рис - основная пища. Получены трансгенные растения рапса, экспрессирующие ген фитоен-синтетазы, в семенах которых значительно повысилось содержание каротиноидов. Показана экспрессия этого же фермента в клубнях картофеля, что приводило к повышенному синтезу каротиноидов и лютеина.

Недавно получены трансгенные растения земляники с повышенным синтезом L-аскорбиновой кислоты. Эти растения отличались суперэкспрессией гена НАДФ-зависимой Д-галактуронат-редуктазы (GalUR). Созданы растения сои с повышенным в пять раз содержанием витамина Е в семенах. Получены растения арабидопсиса с повышенным содержанием фолатов за счет экспрессии в них бактериального гена ГТФ-циклогидролазы-1 (EcGCH).

Уже существует салат с увеличенным содержанием железа, обогащенная лизином кукуруза. Ждет своего запуска в практику сорт сои с повышенным содержанием ненасыщенных жирных кислот (омега-3, омега-6 НЖК и др.), которые не синтезируются в организме человека, а попадают по пищевым цепям в основном через морепродукты из водорослей. Гены, встраиваемые в геном соевых бобов, были выделены из клеток водорослей (разработчик -компания Monsanto).

Разработаны в лабораториях и другие разнообразные трансгенные формы растений с улучшенными лечебно-диетическими свойствами.

Самый первый коммерческий успех получили растения, устойчивые к гербицидам, поскольку позволили очень успешно бороться с сорняками. Самыми распространенными являются трансгенные растения, устойчивые к глифосату (Раундап) - самому популярному гербициду, разлагающемуся в почве на нетоксичные составляющие и потому безопасному для окружающей среды. Ген был выделен из глифосат-устойчивого штамма E. coli.

Выведение растений, устойчивых к вредителям и болезням, поможет резко сократить применение химических средств защиты растений и уменьшить стоимость культивирования. Одними из первых в широкую практику вошли инсектицидные хлопок и кукуруза - так называемые Bt-сорта, которые были получены введением в них гена дельта-эндотоксина из Bacillus. thuringiensis (Bt или Cry-белок).

Bt-белок высокотоксичен для насекомых, но безопасен для других видов животных и человека. Он является протоксином, который расщепляется в кишечнике личинок насекомых, образуя активированный токсин.

Активированный токсин, в свою очередь, специфично связывается с рецепторами в средней кишке насекомых, что приводит к лизису клеток кишечного эпителия. Данный энтомотоксин - смертельный яд для ряда насекомых (в том числе и колорадского жука), но в то же время вполне безопасен для человека и животных, поскольку в организме млекопитающих нет ферментов для его расщепления и усвоения. Взаимодействие Bt-токсина с рецепторами насекомых строго специфично. В природе найдено большое количество штаммов B. thuringiensis, чьи токсины действуют на строго определенные виды насекомых.

Ранее препараты бактерий B. thuringiensis, содержащие Bt-белок, с успехом применяли для борьбы с насекомыми-вредителями, хотя использование таких препаратов достаточно дорого и не всегда эффективно. Введение гена протоксина в растения привело к тому, что Bt-растения перестали поедаться насекомыми. Этим путем был получен трансгенный картофель, устойчивый к колорадскому жуку.

Устойчивость к вирусам может обладать исключительной важностью для повышения сельскохозяйственной продуктивности. В настоящее время в различных странах мира проводят полевые испытания устойчивых к вирусам сортов батата (вирус SPFMV, sweet potato feathery mottle virus), кукурузы (MSV, maize streak virus) и африканской маниоки (мозаичный вирус). Возможно, эти культуры будут коммерциализованы в течение ближайших 3-5 лет.

Из-за сложности генома пшеницы, работа над созданием сортов, устойчивых к вирусу желтой карликовости ячменя (barley yellow-dwarf virus), продвигается очень медленно и до сих пор находится на стадии лабораторных экспериментов. Разработан также устойчивый к нематодам (корневым червям) ГМ-картофель.

Генно-инженерная биотехнология растений для фармакологии делает свои первые успешные практические шаги.

Растения являются удобной, безопасной и экономически выгодной альтернативой для получения различных белков, вакцин и антител по сравнению с системами экспрессии на основе микроорганизмов, культур животных клеток или трансгенных животных. За последние 20 лет множество ценных белков эффективно экпрессировано в растениях. Это белки человеческой сыворотки, регуляторы роста, антитела, вакцины, промышленные ферменты, биополимеры и реагенты для молекулярной биологии. Следует отметить перспективность получения ГМ-растений, синтезирующих новые формы антимикробных пептидов.

Растительные системы имеют все перспективы успешного использования для производства рекомбинантных белков в промышленном масштабе. Некоторые белки, синтезируемые трансгенными растениями, уже производятся западными компаниями или будут выпущены на рынок в ближайшие годы. Например, авидин, трипсин ив -глюкуронидаза, выделяемые из трансгенной кукурузы, производятся фирмой Sigma-Aldrich (США). В скором времени должны быть подготовлены к промышленному производству коллаген, липаза, лактоферрин, лизоцим, синтезируемые трансгенными растениями.

Синтез субъединичных вакцин в трансгенных растениях. Выявленно, что при экспрессии различных антигенов в растениях сохраняется их структурная идентичность и иммуногенность. Антигены, синтезируемые растениями, вызывали иммунный ответ при введении, например, HBs-антиген, синтезируемый растениями картофеля, вызывал у мышей более сильный иммунный ответ, чем дрожжевой. В настоящее время более пятидесяти различных антигенов были экспрессированы в ГМ-растениях, для некоторых из них показана иммуногенность при оральном введении.

Интенсивно разрабатывается концепция «съедобных вакцин» на основе трансгенных растений, чьи плоды, листья и семена годятся в пищу. В случае успеха исчезнет потребность в дорогостоящей очистке антигенов, которая необходима при создании вакцин для парентерального введения. Антигены, экспрессируемые в растениях, защищены растительными клеточными стенками от протеолиза при прохождении пищеварительного тракта и могут быть легко доставлены к клеткам слизистой оболочки кишечника, ответственным за мукозную систему иммунитета.

Таким образом, непрерывно разрабатываются все новые виды пищевых и технических растений с измененными свойствами - с улучшенным составом жиров, повышенным содержанием белков и витаминов, сладкие без сахара и накапливающие меньше вредных для здоровья нитратов, с повышенными декоративными свойствами. Опытные испытания проходят сотни пород деревьев, у которых часть ненужного человеку лигнина заменена полезной целлюлозой. При этом растут ГМ-деревья вдвое быстрее обычных. Трансгенные растения вырабатывают вакцины и лекарства, очищают почву от химического и радиоактивного загрязнения, синтезируют биодеградируемые полимеры для производства упаковки и белок паутины, из которого можно делать колготки и бронежилеты повышенной прочности.

Н.А. Воинов, Т.Г. Волова

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

СОКРАЩЕНИЕ И ОБОЗНАЧЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1.1 История генной инженерии

1.2 Генная инженерия растений

2. СОЗДАНИЕ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ

2.1 Генетически модифицированные растения с помощью бактерии Bacillus thuringiensis

2.2 Трансгенные кукуруза и хлопок

2.3 Трансгенный картофель

3. ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ПРОЕКТЫ СОЗДАНИЯ ТРАНСГЕННЫХ КУЛЬТУР РАСТЕНИЙ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В данной курсовой работе использованы следующие определения:

Bt -растения - генномодифицированные растительные культуры, в которые был вставлен ген, позаимствованный у бактерии Bacillus thuringiensis .

Биоинженерия - направление науки и техники, развивающее применение инженерных принципов в биологии и медицине.

Генетимчески модифицимрованный органимзм - организм, генотип которого был искусственно изменён при помощи методов генной инженерии. Генетически модифицированные организмы - это организмы: растения, животные или микроорганизмы, чей генетический материал ДНК был изменен, причём такие изменения были бы невозможны в природе в результате размножения или естественной рекомбинации.

Гербициды - Химические вещества, применяемые для уничтожения сорных растений.

Гибридизация - процесс образования или получения гибридов, в основе которого лежит объединение генетического материала разных клеток в одной клетке.

Гибриды - организм или клетка, полученные вследствие скрещивания генетически различающихся форм.

Мутагенез - внесение изменений в нуклеотидную последовательность ДНК (мутаций).

Плазмиды - небольшие молекулы ДНК, физически отдельные от геномных хромосом и способные реплицироваться автономно.

Полиплоид - число одинаковых наборов хромосом, находящихся в ядре клетки или в ядрах клеток многоклеточного организма.

Селекция - наука о методах создания новых и улучшении существующих пород животных, сортов растений, штаммов микроорганизмов, с полезными для человека свойствами.

Трансген - фрагмент ДНК, переносимый при помощи генно-инженерных манипуляций в геном определённого организма с целью модификации его свойств. Обычно трансген является фрагментом генома другого вида.

Штамм - это по большому счету чистая культура вируса или бактерии,может также быть культурой клеток. Эта чистая культура изолирована в определенное время и в определенном месте.

СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ

В данной курсовой работе использованы следующие сокращения и обозначения:

БАВ - Биологически активные вещества

Bt - Bacillus thuringiensis

ГМО - Генномодифицированные организмы

% - процент

E.coli - Escherichia coli (кишечная палочка)

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

кг - килограмм

мг - милиграмм

млн - миллион

РНК - рибонуклеимновая кислотам

см - сантиметров

ц - центнер

FAO - Продовольственной и сельскохозяйственной организации ООН

ВВЕДЕНИЕ

В работе раскрывается тема о генетически модифицированных растениях с помощью бактерий Bacillus thuringiensis . В последнее десятилетие благодаря разработке новых и совершенствованию имеющихся методов молекулярно-генетического изучения геномов живых организмов идет активное развитие сельскохозяйственной биотехнологии. Одним из результатов этой активности является производство и широкое внедрение в сельское хозяйство новых генно-модифицированных сортов растений. Использование трансгенных растений в биотехнологии позволяет значительно ускорить процесс получения нового сорта, снизить его себестоимость и получить хорошо прогнозируемый эффект по признаку, определяемому встроенной конструкцией. Но вместе с данным признаком организм приобретает целый набор новых качеств.

Генетическая модификация может давать растению и пищевому продукту, который производится из неё, целый ряд признаков. Большинство культивируемых генно-модифицированных организмов, растении обладают устойчивостью к возбудителям болезней вирусов и грибов, насекомым-вредителям или к гербицидам. Это значительно облегчает культивирование, а также снижает затраты на обработку ядохимикатами. Условно генные модификации растений можно разделить на две группы: модификации повышающие урожайность культуры (путем приобретения устойчивости к неблагоприятным факторам окружающей среды) и модификации, улучшающие технологическую ценность культуры.

Bt - растениями называют генетически модифицированные растения, содержащие д-эндотоксин-кодирующие гены грамм-положительной аэробной спорообразующей бактерии Bacillus thuringiensis .

В настоящее время промышленно выращивают около тридцати сельскохозяйственных Bt -культур. В этот список входит кукуруза Zeamays L , хлопчатник Gossypium hirsutum L , картофель Solanum tubersoum L , особый сорт рапса Brassica napus L , рис Oryza sativa L , брокколи Brassica oleracea L var. cymosa , арахис Arachis hypogea L , баклажан Solanum melongena L , табак Nicotiana tabacum L и т.д. Большинство сортов трансгенной кукурузы содержат ген, кодирующий белок Cry1Ab и защищающий их от опасного вредителя - личинок кукурузного стеблевого мотылька Ostrinia nubilalis Hbn .

Цель курсовой работы: изучить генетически модифицированные растениe с помощью бактерий Bacillus thuringiensis .

Задачи курсовой работы:

1. Рассмотреть достижения генной инженерии.

2. Определить виды агрокультур где используются Bt бактерии.

3. Выявить преимущество и экономическую рентабельность Bt растений. генный инженерия растение бактерия

1 . ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

1.1 История генной инженерии

Генная инженерия появилась благодаря работам многих исследователей в разных отраслях биохимии и молекулярной генетики. На протяжении многих лет главным классом макромолекул считали белки. Существовало даже предположение, что гены имеют белковую природу. Лишь в 1944 году Эйвери, Мак Леод и Мак Карти показали, что носителем наследственной информации является ДНК. С этого времени начинается интенсивное изучение нуклеиновых кислот. Спустя десятилетие, в 1953 году Дж. Уотсон и Ф. Крик создали двуспиральную модель ДНК. Именно этот год принято считать годом рождения молекулярной биологии.

На рубеже 50 - 60-х годов были выяснены свойства генетического кода, а к концу 60-х годов его универсальность была подтверждена экспериментально. Шло интенсивное развитие молекулярной генетики, объектами которой стали E. coli , ее вирусы и плазмиды. Разработаны методы выделения высокоочищенных препаратов неповрежденных молекул ДНК, плазмид и вирусов. ДНК вирусов и плазмид вводили в клетки в биологически активной форме, обеспечивая ее репликацию и экспрессию соответствующих генов. В 70-х годах был открыт ряд ферментов, катализирующих реакции превращения ДНК. Особая роль в развитии методов генной инженерии принадлежит рестриктазам и ДНК-лигазам .

Историю развития генетической инженерии можно условно разделить на три этапа.

Первый этап связан с доказательством принципиальной возможности получения рекомбинантных молекул ДНК in vitro . Эти работы касаются получения гибридов между различными плазмидами. Была доказана возможность создания рекомбинантных молекул с использованием исходных молекул ДНК из различных видов и штаммов бактерий, их жизнеспособность, стабильность и функционирование.

Второй этап связан с началом работ по получению рекомбинантных молекул ДНК между хромосомными генами прокариот и различными плазмидами, доказательством их стабильности и жизнеспособности.

Третий этап - начало работ по включению в векторные молекулы ДНК генов эукариот, главным образом, животных.

Формально датой рождения генетической инженерии следует считать 1972 год, когда в Стенфордском университете П. Берг, С. Коэн, Х. Бойер с сотрудниками создали первую рекомбинантную ДНК, содержавшую фрагменты ДНК вируса SV40, бактериофага и E. Coli .

Генетическая инженерия - это методы получения рекомбинантных ДНК, объединяющих последовательности равного происхождения, т.е. осуществляется перенос целых хромосом от клеток-доноров в клетки-реципиенты.

В основу генно-инженерных методов заложена способность ферментов рестриктаз расщеплять ДНК на отделочные нуклеотидные последовательности, которые могут быть использованы для встраивания их в гены бактериальных клеток с целью получения гибридных или химерных форм, эти гибридные формы состоят из собственной ДНК и дополнительно встроенных фрагментов несвойственной им ДНК. Поэтому методами генетической инженерии добиваются клонирования генов. Это когда выделяют нужный отрезок ДНК из какого-либо биообъекта и затем получают любое количество его, выращивая колонии генетически идентичных клеток, содержащих заданный участок ДНК. Клонирование ДНК - это получение ее генетически идентичных колоний .

Сущность геномной инженерии заключается в целенаправленной глубокой перестройке генома прокариот вплоть до создания новых видов. При геномной инженерии вносят большое количество дополнительной генетической информации и получают гибридный организм, который отличается от исходного по многим признакам.

На сегодняшний день существует несколько сотен генетически изменённых продуктов. Уже на протяжении нескольких лет их употребляют миллионы людей в большинстве стран мира. Есть данные, что подобными технологиями пользуются для получения продуктов, реализуемых через сеть «McDonalds». Многие крупные концерны, типа «Unilever, Nestle, Danon» и другие используют для производства своих товаров генно-инженерные продукты и экспортируют их во многие страны мира. Но во многих странах такие продукты обязательно должны содержать на упаковке надпись "Сделано из генетически модифицированного продукта".

Некоторые считают, что, внося изменения в генный код растения или животного, учёные делают то же самое, что и сама природа. Абсолютно все живые организмы от бактерии до человека - это результат мутаций и естественного отбора.

Пример. Какое-либо растение выбросило несколько тысяч семян, и они проросли. Среди тысяч появившихся ростков некоторые обязательно будут отличаться от родителя, то есть фактически окажутся мутантами. Если изменения вредны для растения, то оно погибнет или будет угнетать, а если полезны, то оно даст более приспособленное и совершенное потомство, и так может образоваться новый вид растения. Но если природе для образования новых видов требуется много столетий или тысячелетий, то учёные производят этот процесс за несколько лет. Какой-то принципиальной же разницы нет.

Итак, процедуры генетической инженерии сводятся к тому, что из набора фрагментов ДНК, содержащих нужный ген, собирают гибридную структуру, которую затем вводят в клетку. Введенная генетическая информация экспрессируется, что приводит к синтезу нового продукта. Таким образом, вводя в клетку новую генетическую информацию в виде гибридных молекул ДНК, можно получить измененный организм .

1. 2 Генная инженерия растений

Генная инженерия растений сегодня - самое бурно развивающееся направление не только биотехнологии, но, пожалуй, и всего научно-технологического комплекса. Но ее применение вызывает ожесточенные споры: сторонники, прежде всего создатели новых форм растений говорят о второй «зеленой революции», которая решит все наболевшие проблемы сельского хозяйства, а противники, преимущественно радикальные «зеленые» организации усматривают в ГМО не только гипотетические риски в будущем, но и угрозу, якобы уже сегодня нависшую над человеком и природой.

Это открытие оказалось очень важным для генной инженерии растений. Собственно, ее история и началась с момента, когда ученые научились заменять гены растения и гены бактерии в Т-ДНК генами, которые необходимо ввести в растение. Обманутая бактерия, внедряя свою ДНК в хромосому растения, в свою очередь, обманывает его геном, вынуждая исправно синтезировать необходимые человеку продукты .

Противники использования достижений генной инженерии обычно ссылаются на то, что все испытания пока были краткосрочными (самой генной инженерии 20 лет от роду), а влияние ГМ-продуктов может проявиться через длительное время -- в следующих поколениях. Но при этом они упорно не хотят признавать, что накапливающиеся в окружающей среде ядохимикаты и удобрения, столь жадно потребляемые традиционным сельским хозяйством, также вполне могут сказаться на потомках. И чем же в этом случае генная инженерия растений опаснее существующих методик их химической защиты, без которых ни на одном крупном поле сегодня не получить приличного урожая и против которых зеленые не так уж возражают. Следующий довод - неизвестно, как новые растения повлияют на существующие пищевые цепи и экологический баланс в мире нельзя, исключить, что насекомые, обитающие на ГМ-растениях, подвергнутся мутации и последствия этого могут быть непредсказуемыми. И снова почему-то упускается из виду, что подобные мутации ежесекундно происходят в натуральной природе, которая вся сплошь состоит из генетически измененных организмов, ибо эволюция и происходила благодаря мутациям.

Ведущая роль в применении генно-инженерных растений принадлежит США. В основе генной инженерии растений лежат методы культивирования клеток и тканей растений in vitro и возможность регенерации целого растения из отдельных клеток .

Растения имеют одно очень важное преимущество перед животными, а именно возможна их регенерация in vitro из недифференцированных соматических тканей с получением нормальных, фертильных, способных завязывать семена растений. Это свойство открывает для молекулярных биологов большие возможности в изучении функционирования генов, введенных в растения, а также используется в селекции растений. Для конструирования растений необходимо решить следующие задачи: выделить конкретный ген, разработать методы, обеспечивающие включение его в наследственный аппарат растительной клетки, регенерировать из единичных клеток нормальное растение с измененным генотипом. Таким образом, методология генетической инженерии в отношении растений направлена на коренное изменение методов традиционной селекции, с тем чтобы желаемые признаки растений можно было получать путем прямого введения в них соответствующих генов вместо длительной работы по скрещиваниям.

Формальной датой рождения генетической инженерии растений является полученное с помощью Ti-плазмидного вектора первое в мире химерное растение санбин (sunbeen) как результат переноса гена запасного белка бобовых в геном подсолнечника (sunflower + been). Это было первым ощутимым, хотя, быть может, и несовершенным свидетельством того, что в отношении растений генетическая инженерия сможет оправдать надежды специалистов в области молекулярной генетики, биологии и селекции.

Самые распространенные ГМ-растения в мире - соя, кукуруза, масличный рапс и хлопок. В некоторых странах для выращивания одобрены трансгенные помидоры, рис, кабачки. Эксперименты проводятся на подсолнечнике, сахарной свекле, табаке, винограде, деревьях и т.д. В тех странах, где пока нет разрешения на выращивание трансгенов, проводятся полевые испытания.

Чаще всего культурные растения наделяют устойчивостью к гербицидам, насекомым или вирусам. Устойчивость к гербицидам позволяет «избранному» растению быть невосприимчивым к смертельным для других дозам химикатов. В результате поле очищается от всех лишних растений, то есть сорняков, а культуры, устойчивые или толерантные к гербицидам, выживают. Чаще всего компания, продающая семена подобных растений, предлагает в наборе и соответствующие гербициды. Устойчивая к насекомым флора становится поистине бесстрашной: например, непобедимый колорадский жук, съедая листик картофеля, погибает. Почти все такие растения содержат встроенный ген природного токсина - земляной бактерии Bacillus thuringiensis . Устойчивость к вирусу растение приобретает благодаря встроенному гену, взятому из этого же самого вируса.

Основная масса трансгенов культивируется в США, в Канаде, Аргентине, Китае, меньше - в других странах. Европа же очень озабочена. Под натиском общественности и организаций потребителей, которые хотят знать, что они едят, в некоторых странах введен мораторий на ввоз таких продуктов (Австрия, Франция, Греция, Великобритания, Люксембург). В других принято жесткое требование маркировать генетически измененное продовольствие .

2. СОЗДАНИЕ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ

Еще 10 лет тому назад биотехнология растений заметно отставала в своем развитии, но за последние 3 года наблюдается быстрый выброс на рынок трансгенных растений с новыми полезными признаками. Трансгенные растения в США в 1996 году занимали площадь 3 млн. акров, в 1997 году площадь увеличилась до 15 млн. акров, в 1998 году - до 60 млн. акров, а в 2000 году до 80 млн. акров. Темпы расширения площади просто поражают своей быстротой. Поскольку основные трансгенные формы кукурузы, сои, хлопчатника с устойчивостью к гербицидам и насекомым хорошо себя зарекомендовали, то не сложно догадаться, что площадь под генноиженерные растения в 2001 году увеличилась примерно в 4 - 5 раз.

В апреле 1998 года доля в процентах трансгенных форм растений в сельском хозяйстве составила: кукуруза - 6%; соя - 12%; хлопчатник - 15%; томаты - <1%.

Так как число жителей за последнее столетие увеличилось с 1.5 до 6.5 млрд. человек, а к 2020 году предполагается вырост до 9 млрд., таким образом, возникает огромная проблема, стоящая перед человечеством. Эта проблема заключается в огромном увеличение производства продуктов питания, несмотря на то, что за последние 40 лет производство увеличилось в 2.5 раза, все равно этого не достаточно. Другая проблема возникла с медицинским лечением. Несмотря на огромные достижение современной медицины, производимые сегодня лекарственные препараты столь дороги, что часть населения земли полностью полагаются на традиционные донаучные методы лечения, прежде всего, на неочищенные препараты растительного происхождения .

В развитых странах лекарственные средства на 25% состоят из природных веществ, выделенных из растений. Открытия последних лет свидетельствуют о том, что растения еще долго будут оставаться источником полезных биологически-активных веществ (БАВ), и что способности растительной клетки к синтезу сложных БАВ все еще значительно превосходят синтетические способности инженера-химика. Вот почему ученые взялись за проблему создания трансгенных растений.

Отсчёт истории генетической инженерии растений принято вести с 1982 года, когда впервые были получены генетически трансформированные растения. Одним из наиболее распространенных методов трансформации является технология, основанная на обстреле ткани микрочастицами золота или других тяжелых металлов, покрытыми раствором ДНК. Все выращиваемые ныне коммерческие сорта получены в основном с помощью данного метода .

Введение генов в клетки растений - основные способы. Ввести чужеродную ДНК в растения можно различными способами. Для двудольных растений существует естественный вектор для горизонтального переноса генов: плазмиды агробактерий. Что касается однодольных, то, хотя в последние годы достигнуты определенные успехи в их трансформации агробактериальными векторами, все же подобный путь трансформации встречает существенные затруднения.

Для трансформации устойчивых ("рекальцитрантных") к агробактериям растений разработаны приемы прямого физического переноса ДНК в клетку, многие из которых взяты из практики работы с клетками бактерий или животных. Эти методы достаточно разнообразны, они включают: бомбардировку микрочастицами или баллистический метод; электропорацию; обработку полиэтиленгликолем; перенос ДНК в составе липосом и другие .

Наиболее продуктивным и чаще всего используемым является метод бомбардировки микрочастицами. При достаточной скорости эти частицы могут непосредственно проникать в ядро, что сильно повышает эффективность трансформации. Этим же методом можно, впрочем, трансформировать и другие ДНК-содержащие клеточные органеллы -хлоропласты и митохондрии.

В последнее время был разработан и успешно применен также комбинированный метод трансформации, названный агролистическим. При этом чужеродная ДНК вводится в ткани каким-либо физическим методом, например, баллистическим. Вводимая ДНК включает как Т-ДНК вектор с целевым и маркерным геном, так и агробактериальные гены вирулентности, поставленные под эукариотический промотор. Временная экспрессия генов вирулентности в растительной клетке приводит к синтезу белков, которые правильно вырезают Т-ДНК из плазмиды и встраивают ее в хозяйский геном, как и при обычной агробактериальной трансформации.

После проведения тем или иным способом трансформации растительной ткани ее помещают in vitro на специальную среду с фитогормонами, способствующую размножению клеток. Среда обычно содержит селективный агент, в отношении которого трансгенные, но не контрольные клетки приобретают устойчивость. Регенерация чаще всего проходит через стадию каллуса, после чего при правильном подборе сред начинается органогенез (побегообразование). Сформированные побеги переносят на среду укоренения, часто также содержащую селективный агент для более строгого отбора трансгенных особей .

2 . 1 Генетически модифи цированные растения с помощью бактерии Bacillus thuringiensis

Bt -белки - инсектицидные белки Bacillus thuringiensis , экспрессируемые модифицированными растениями, что обеспечивает безопасную технологию борьбы с насекомыми-вредителями. Bt -защищенные кукуруза, хлопок и картофель были внедрены в сельское хозяйственую практику в США в 1995-1996 гг., и в 1997 г. занимали площадь в 4 млн га, в 1998 г. -8 млн га, а в 1999 г. -11,7 млн га. Исключительно быстрое признание Bt -защищенных культур демонстрирует удовлетворенность производителей высоким качеством и объемами получаемой продукции. Модифицированные растения обеспечивают высокоэффективную борьбу с большинством насекомых-вредителей, таких как европейский зерновой мотылек, юго-западный зерновой мотылек, табачная листоверка, хлопковая листоверка, розовый коробочный червь (хлопковая совка) и колорадский жук, позволяя сократить применение обычных химических пестицидов. Bt -защищенные культуры обеспечивают значительно более высокие урожаи хлопка и кукурузы. По оценкам специалистов, общая экономия средств производителями, использующими Bt -защищенный хлопчатник, в США в 1998 г. составила до 92 млн долларов. Другие преимущества этих культур состоят в том, что они содержат в зерне пониженные концентрации фунготоксинов, что позволяет осуществлять дополнительную борьбу с вредителями, используя полезных насекомых, численность которых увеличивается благодаря снижению уровня обработки посевов инсектицидами широкого спектра действия. Разработаны и внедряются специальные планы ведения с.-х. работ, направленные на сохранение чувствительности насекомых к данному виду защиты и на эффективное применение данной технологии в будущем. Широкомасштабные испытания Bt -защищенных культур установили безопасность получаемой продукции для человека и окружающей среды. Исследования острой, продолжительной и долгосрочной токсикологии, проводимые в течение 40 лет, показали безопасность микробиологической Bt - продукции, включая вырабатываемые микроорганизмами инсектицидные белки, которые полностью одобрены для коммерческого использования. Эксперименты по токсикологии на млекопитающих и исследования Bt -продукции в желудочно-кишечном тракте подтвердили, что эти белки не токсичны для человека и не вызывают опасений с точки зрения их возможной аллергенности. Было показано, что пищевые продукты и их компоненты, получаемые из Bt -защищенных растений, практически по всем параметрам соответствуют тем же продуктам, получаемым из обычных растений. Другие живые организмы, не являющиеся прямыми вредителями, подвергнутые воздействию высоких доз Cry-белка, не проявили практически никаких неблагоприятных реакций за исключением некоторых насекомых, тесно связанных с упомянутыми группами вредителей. Поскольку Cry-белок содержится непосредственно внутри растения (в микроколичествах), его потенциальное воздействие на сельском хозйстве, рабочих и живые организмы, не относящихся к группе вредителей, ничтожно, и, следовательно, воздействие этих растений на окружающую среду очень незначительно. Безопасность Bt -защищенных растений для человека и окружающей среды подтверждается многолетней историей безопасного применения Bt -микробных препаратов во всем мире.

Список сельскохозяйственных культур, генно-инженерные сорта которых официально допущены к использованию во всех странах мира, включает 20 наименований: соя, кукуруза, рапс, хлопчатник, томаты, картофель, рис, сахарная свекла, лен, турнепс, кабачки, дыни, табак, па­пайя, цикорий, пшеница, гвоздика, полевица, люцерна, слива. Однако не все они выращиваются в промышленных масштабах. Ряд генетически модифицированных культур, таких, как картофель, кабачки, папайя и томаты, относительно массово выращивался лишь в отдельные годы. В России массовое производство трансгенных растений пока не разрешено. По состоянию на 2011 году, в России разрешены к использованию 17 линий трансгенных растений таблица 1.

Таблица№ 1. Регуляторные последовательности и гены трансгенных вставок линий, разрешенных для применения в пищевых продуктах и кормах на территории Российской Федерации .

Растения

Производитель

Промотор

Monsanto, США

Bayer Crop Science, Германия

Bayer Crop Science, Германия

Monsanto, США

Кукуруза

Monsanto, США

Monsanto, США

Monsanto, США

Monsanto, США

Monsanto, США

Syngenta Crop Protection

AG, Швейцария

Bayer Crop Science, Германия

Syngenta Seeds Inc,

Картофель

Луговской

Центр Биоинженерии

Елизавета

Центр Биоинженерии

Bayer CropScience,

Германия

Сахарная свекла

Monsanto, США

2.2 Т рансгенные кукуруза и хлопок

В США приблизительно две трети площадей, занятых кукурузой, засеяны семенами, содержащими Bt ген. Это одна из важнейших составляющих частей огромной кампании по внедрению искусственно улучшенных, генетически модифицированных линий сельскохозяйственных растений, среди которых уже есть линии устойчивые к отдельным гербицидам, к засухе и другим неблагоприятным факторам. Каждая из этих линий позволяет снизить те или иные сельскохозяйственные риски, но подавляющее число фермеров останавливают свой выбор на Bt семенах.

Первая линия кукурузы с Bt геном, защищающим растение от определенных групп насекомых, была внедрена в 1996 году. Недавно Центр по экономическим исследованиям Департамента по сельскому хозяйству США подготовил анализ 15-летней истории внедрения и успехов Bt кукурузы на американских полях. В представленном отчете имеются сведения, свидетельствующие, что в 2000 году Bt семенами было засеяно 19% кукурузных полей, а к 2011 году эта цифра возросла до 65%. Попытка подсчета экономических преимуществ использования устойчивой к насекомым ГМ кукурузы в первые пять лет после начала внедрения дала следующие результаты: В Айове на полях, где используется Bt кукуруза, урожайность была выше примерно на 4,5 ц/га.

В Миннесоте урожайность кукурузы на полях, засаженных Bt линиями кукурузы, была выше на 11,4 ц/га. В среднем, урожайность Bt линий была на 8,1 ц/га выше по сравнению с сортами традиционной селекции. Внедрение данных линий позволило увеличить урожайность на 2,8-6,6%. В Пенсильвании и Мэриленде урожайность повысилась на 5,5%.

Фермеры, использовавшие в 2001 г. линии Bt кукурузы, имели урожай на 7,8 ц/га выше, по сравнению с теми, кто отказался от этой технологии. В 2005 г. средние урожаи у тех, кто использовал Bt линии, были уже на 10,4 ц/га выше по сравнению со средними показателями хозяйств, где не использовались ГМ растения.

Результат налицо - более высокие урожаи. Аналитики из Департамента по сельскому хозяйству США провели оценку экономической обоснованности использования Bt кукурузы в следующей пятилетке. По итогам вегетационного сезона 2010 г., был проведен опрос владельцев 1208 фермерских хозяйств в 19 штатах США, являющихся основными производителями этой культуры. Среди опрошенных, 77% подтвердило, что они видят реальное увеличение урожайности от использования Bt сортов. Еще 10% заявили, что у них значительно сократились временные затраты на уход за растениями, а 6% выбрали эту технологию из-за высокой цены на инсектицидные препараты.

Анализ экономических показателей в этих хозяйствах свидетельствует, что средний урожай кукурузы в них на 16 ц/га, или примерно на 20%, выше по сравнению с теми хозяйствами, где пока отказываются от новых технологий. Это равноценно почти 300 дополнительным долларам с гектара.

Так как Bt линии предназначены для повышения устойчивости к насекомым, окончательная экономическая оценка должна отталкиваться от объемов использования инсектицидов при уходе за традиционными сортами. Следует заметить, что последние два года, попавшие в поле зрения аналитиков, отличались относительно невысоким уровнем давления со стороны вредителей, поэтому и объемы использования инсектицидов при уходе за не-ГМ кукурузой были небольшими. Интересен и тот факт, что за первые 10 лет использования генетически модифицированной Bt кукурузы использование инсектицидов резко сократилось. В 2001 году в США было продано 2,0 млн. т инсектицидов для ухода за кукурузой, в 2005 году - 1,4 млн. т, а в 2010году - только 0,7 млн. т.

Вывод, сделанный по результатам проведенных исследований, однозначен: "Bt кукуруза позволяет получать более высокие урожаи, увеличивает прибыльность хозяйств и спрос на семена". Если быть более точным, то экономический анализ показал, что выращивание Bt кукурузы на 10% площадей, на уровне хозяйства приводит к 2,3-процентному росту прибылей, 2,3-процентному повышению урожайности (на 2,1 ц/га) и 2,1-процентному увеличению спроса на семена. Кроме того, показано, что переход на ГМ кукурузу не оказал статистически значимого влияния на снижение спроса на инсектициды. В настоящее время 90% американских фермеров не используют инсектициды при выращивании кукурузы. Помимо этого ученые добавляют: "экономические последствия внедрения ГМ культур зависят от степени давления со стороны вредителей, цен на биотехнологичные семена и стоимости альтернативных средств борьбы с насекомыми".

К настоящему времени ген бактериального токсина присутствует в 60% всей выращиваемой в США кормовой и технической кукурузы, но отсутствует в сладкой кукурузе и в других сортах кукурузы, поступающих в пищевую промышленность. Этот же ген включен в большую часть выращиваемых в США хлопка и сои. Для защиты хлопковых плантаций трансгенная технология считается предпочтительнее и безопаснее, чем частое опрыскивание и опыление пестицидами. Трансгенный хлопок - пока единственная культура, которая распространилась по многим производящим его странам .

2 .3 Т рансгенный картофель

Значительно больший успех выпал на долю технического картофеля, который выращивается для производства амилопектина и используется в производстве глянцевой бумаги, а также как кормовой продукт. Этот картофель, названный Amflora , был выведен крупной немецкой биотехнологической компанией BASF сравнительно недавно. В его клубнях образуется амилопектин, одна из разновидностей крахмала, более устойчивая к действию амилазы. Несмотря на протесты, этот картофель высевается в Германии, а с 2010 году и в Швеции. Выращивание трансгенного картофеля Amflora , в порядке исключения, было одобрено Европейской Комиссией.

3. ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ПРОЕКТЫ СОЗДАНИЯ ТРАНСГЕННЫХ КУЛЬТУР РАСТЕНИЙ

Улучшение качества продовольственных продуктов пока находится лишь в стадии интересных проектов. В 2006 г. были экспериментально получены клонированные свиньи с генами из червей, которые добавляли к насыщенному свиному жиру ненасыщенные Омега-3 жирные кислоты .

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Расмотрены достижения и перспективы генетической инженерии и инженерии растений и на их осневе выращивание генетически модифицированных растений с помощью бактерий Bacillus thuringiensis . Получение трансгенных Bt растений является на данный момент одной из перспективных и наиболее развивающихся направлений агропроизводства. Существуют проблемы, которые не могут быть решены такими традиционными направлениями как селекция, кроме того, что на подобные разработки требуются годы, а иногда и десятилетия. Создание трансгенных Bt растений, обладающих нужными свойствами, требует гораздо меньшего времени и позволяет получать растения с заданными хозяйственно ценными признаками, а также обладающих свойствами, не имеющими аналогов в природе. Примером последнего могут служить полученные методами генной инженерии сорта растений, обладающих повышенной устойчивостью к насекомым. Изучение экономических эффектов выращивания устойчивых к насекомым Bt культур указывает на преимущества, получаемые фермерами в случаях нашествий вредителей или появления их устойчивых форм. Польза от перехода на Bt -культуры заключается не только в уменьшении потерь урожая за счет более высокой эффективности защиты от насекомых-вредителей по сравнению с химическими инсектицидами, но и в финансовой выгоде за счет отказа от последних. Культивирование Bt -культур является простой и эффективной альтернативой распылению химикатов, так как растения синтезируют инсектицидный белок в течение всего вегетативного периода, в то время как эффективность опрыскивания химическими инсектицидами зависит от погодных условий и трудностей в определении оптимального времени обработки. Результаты всех исследований, проведенных в развивающихся странах, указывают на то, что переход с традиционных сортов на Bt -растений увеличивает урожай, снижает использование пестицидов и повышает чистый доход. Еще рано делать окончательные выводы о преимуществах Bt -сортов перед традиционными, однако специалисты ФАО - Продовольственной и сельскохозяйственной организации ООН (Food and Agriculture Organization, FAO) - считают, что имеющиеся на сегодняшний день данные и активное внедрение Bt -культур в сельскохозяйственную практику свидетельствуют в их пользу.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. «Биотехнология проблемы и перспективы» - Егоров Н.С., Москва, «Высшая школа» 1987 г.

2. «Сельскохозяйственная биотехнология» - Калашникова Е.А., Шевелуха В.С., Воронин Е.С., «Высшая школа» 2003 г.

3. Сайт «Biotechnolog» Н. Кульмина 1995-2013

4. Мендель, «Опыты над растительными гибридами», 1935

5. М.Е. Аспиз - «Энциклопедический словарь юного биолога»

6. «Основы биотехнологии: Учебное пособие для высших учебных заведений» Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А Живухина. М: «Академия» 2003

7 Н.П. Дубинин - «Очерки о генетике»

8 Брукс Г, Барфут П. ГМ-культуры: итоги первых десяти лет - глобальные социально-экономические и экологические последствия // Докл. ISAAA, Нью-Йорк, 2006. Вып. № 36. 124 с.

9 Глазко В.И. Кризис аграрной цивилизации и генетически модифицированные организмы (ГМО). Киев: PANOVA, 2006. 206 c.

10 Лутова Л. А., Проворов Н. А., Тиходеев О. Н. и др. Генетика развития растений. СПб.: Наука, 200

11 Глеба Ю. Ю. Биотехнология растений // Соросовский образовательный журнал. № 6. 1998

12. Михалко, Е. Р. Методические аспекты оценки риска возможных неблагоприятных эффектов ГМО для здоровья человека и их влияние на продовольственную безопасность государства. Наука о человеке: гуманитарные исследования. - 2010. - № 5.- С. 89-95

13 Кузнецов В.В., Куликов А.М. Генетически модифицированные организмы и полученные из них продукты: реальные и потенциальные риски // Рос.хим. журн. 2010. Т. XLIX. № 4. С. 84-91.

14 Викторов А.Г. Эволюция резистентности фитофагов к трансгенным коммерческим Bt-растениям: можно ли создать эффективное инсектицидное растение? // Физиология растений. 2010. Т. 62. С. 17-27.

Размещено на Allbest.ru

...

Подобные документы

    Основы и техника клонирования ДНК. Этапы генной инженерии бактерий. Развитие генетической инженерии растений. Генетическая трансформация и улучшение растений с помощью агробактерий, источники генов. Безопасность генетически модифицированных растений.

    реферат , добавлен 11.11.2010

    Сущность генной и клеточной инженерии. Основные задачи генной модификации растений, анализ вредности их употребления в пищу. Особенности гибридизации растительных и животных клеток. Механизм получения лекарственных веществ с помощью генной инженерии.

    презентация , добавлен 26.01.2014

    Этапы получения трансгенных организмов. Агробактериальная трансформация. Схема создания генетически модифицированного организма. Пример селективного маркера растений. Процесс подавления экспрессии генов (сайленсинг). Направления генной инженерии растений.

    презентация , добавлен 24.06.2013

    Возможности генной инженерии растений. Создание гербицидоустойчивых растений. Повышение эффективности фотосинтеза, биологической азотфиксации. Улучшение качества запасных белков. Экологические, медицинские и социально-экономические риски генной инженерии.

    контрольная работа , добавлен 15.12.2011

    Пересадка генов и частей ДНК одного вида в клетки другого организма. История генной инженерии. Отношение к генетически модифицированным организмам в мире. Новые ГМ-сорта. Что несёт человечеству генная инженерия. Какие перспективы генной инженерии.

    презентация , добавлен 24.02.2015

    Суть и задачи генной инженерии, история ее развития. Цели создания генетически модифицированных организмов. Химическое загрязнение как следствие ГМО. Получение человеческого инсулина как важнейшее достижение в сфере генно-модифицированных организмов.

    реферат , добавлен 18.04.2013

    Генная инженерия: история возникновения, общая характеристика, преимущества и недостатки. Знакомство с новейшими методами генной инженерии, их использование в медицине. Разработка генной инженерии в области животноводства и птицеводства. Опыты на крысах.

    курсовая работа , добавлен 11.07.2012

    Использование генной инженерии как инструмента биотехнологии с целью управления наследственностью живых организмов. Особенности основных методов и достижений генной инженерии в медицине и сельском хозяйстве, связанные с ней опасности и перспективы.

    доклад , добавлен 10.05.2011

    Генная инженерия - метод биотехнологии, который занимается исследованиями по перестройке генотипов. Возможности генной инженерии. Перспективы генной инженерии. Уменьшение риска, связанного с генными технологиями.

    реферат , добавлен 04.09.2007

    Сельскохозяйственные растения и вакцины производимые помощью генной инженерии. Изменение свойств сельскохозяйственных технических растений. Генные вакцины. Аргументы против распространения генетически модифицированных продуктов.

Одной из основных задач селекционеров всегда было получение высокоурожайных сортов растений с повышенной пищевой ценност ью. Наибольшее внимание уделялось при этом таким зерновым культурам как кукуруза, пшеница и рис, однако были осуществлены программы и по скрещиванию других сельскохозяйственных и садовых культур. В качестве важного инструмента прямого генетического воздействия на растения применяется технология рекомбинантных ДНК, широко использующаяся в микробиологических системах. К настоящему времени разработано несколько эффективных систем переноса ДНК и экспрессирующих векторов , которые работают в ряде растительных клеток. Одним из достоинств последних является их тотипотентность : из одной клетки может быть регенерировано целое растение, так что из клеток, сконструированных генноинженерными методами, можно получить фертильные растения, все клетки которых несут чужеродный ген (трансгенные растения). Если такое растение цветет и дает жизнеспособные семена, то желаемый признак передается последующим поколениям.

Можно привести три основных аргумента в пользу получения трансгенных растений. Во-первых, введение гена (генов) часто приводит к повышению сельскохозяйственной ценности и декоративных качеств культурных растений. Во-вторых, трансгенные растения могут служить живыми биореакторами при малозатратном производстве экономически важных белков или метаболитов. В-третьих, генетическая трансформация растений (трансгеноз) позволяет изучать действие генов в ходе развития растения и других биологических процессов.

На сегодняшний день уже получены многочисленные трансгенные растения на основе как культурных, так и диких видов, которые приобрели такие ценные признаки как инсектицидная активность, устойчивость к вирусным заболеваниям и гербицидам, замедление старения, устойчивость к неблагоприятным условиям окружающей среды, измененная окраска цветков, повышенная пищевая ценность семян. Генная инженерия внесла коррективы в традиционные программы разведения растений, в рамках которых для выведения нового сорта требуется от 10 до 15 лет.

Один из главных методических приёмов генной инженерии растений основан на использовании Ti-плазмиды из Agrobacterium tumefaciens . Эта грамотрицательная почвенная бактерия - фитопатоген, который в процессе своего жизненного цикла трансформирует клетки растений. Трансформация приводит к образованию корончатого галла - опухоли, нарушающей нормальный рост растения (рисунок 1). Этой болезни, имеющей серьезные агрономические последствия, подвержены только двудольные растения, в частности виноград, косточковые фруктовые деревья, розы.

Рисунок 1 - Инфицирование растений агробактериями

Образование корончатого галла начинается с проникновения, встраивания в геном растительных клеток и экспрессии специфического фрагмента бактериальной плазмидной ДНК - так называемой Т-ДНК (от англ. transferred DNA), длина которой составляет 12-22 тыс. пар оснований. Т-ДНК - это часть плазмиды, индуцирующей раз­витие опухоли (Tumor inducing plasmid, Ti –плазмиды); ее несут большинство штаммов A . tumefaciens .

Т-ДНК содержит гены опухолеобразования , они кодируют фер­менты синтеза фитогормонов , вызывающие увеличение размеров растительных клеток (ауксин ) и их безудержную пролиферацию (цитокинин ). Кроме того, инфицированные растительные клетки начинают синтезировать специфическую аминокислоту опин , который может использоваться только бактериями A . tumefaciens .

Инфекционный процесс начинается с при­крепления A . tumefaciens к клеткам растения в месте повреждения, часто у основания стебля (у корневой шейки). Ранее предполагалось, что A . tumefaciens заражает именно поврежденные рас­тения вследствие разрушения клеточной стенки и устранения физического барьера, затрудняю­щего проникновение бактерий в клетку. Однако сейчас считается, что все дело в специфических фенольных соединениях, ацетосирингоне и гидроксиацетосирингоне , которые выде­ляет поврежденное растение; они активируют кластер генов вирулентности (vir), которые локализова­ны в участке Ti - плазмиды длиной 35 т.п.н., на­ходящемся за пределами Т-ДНК. Продукты vir -генов необходимы для транспорта и встраивания Т-ДНК в геном растительной клетки. Рядом находятся гены утилизации опинов, а также локусы, контролирующие репликацию плазмиды в бактериальной клетке и ее перенос при бактериальной конъюгации (рис. 2).

Один из пяти генов вирулентности VirD кодирует эндонуклеазу . Область Т-ДНК окружена одинаковыми повторами длиной 25 пар оснований. Эти последовательности являются сайтами узнавания VirD - эндонуклеазы, режущей точно между 3-м и 4-м основаниями 25 пар оснований повтора. Эта эндонуклеаза ответственна за вырезание Т-ДНК. Встраивание её происходит по механизму гомологичной рекомбинации; имеется гомология между растительной ДНК по обеим сторонам от места встраивания и наружными областями плазмидной ДНК агробактерий.

В геном растения могут встраиваться несколько копий Т-ДНК. После встраивания в хромосому Т-ДНК становится обычной частью генома расте ния, происходит её транскрипция РНК - полимеразой растения - хозяина, а затем – трансляция. Сама бактерия в клетку не проникает, а остается в межклеточном пространстве и использует растительные клетки со встроенной Т-ДНК как фабрику , продуцирующую для неё опины - источник азота и углерода.

Чтобы использовать природную способность A . tumefaciens проникать в растительные клетки для доставки в них клонированных генов, были созданы векторы на основе Ti -плазмиды.

Рисунок 2 - Генетическая карта Ti-плазмиды. Т-ДНК содержит гены ауксина, цитокинина и опина, которые транскрибируются только в растительных клетках. За пределами Т-ДНК находятся vir-гены, гены ферментов катаболизма опина и сайт начала репликации. Л и П – левая и правая фланкирующие последовательности

Все векторы на основе Т i - плазмид имеют следу­ющие элементы :

Селективный маркерный ген, например ген неомицинфосфотрансферазы, который обес­печивает устойчивость трансформированных растительных клеток к канамицину. Пос­кольку этот ген (как и многие другие маркер­ные гены, используемые при трансформации растений) по своей природе прокариотический, необходимо поставить его под конт­роль растительных (эукариотических) сигна­лов регуляции транскрипции, в том числе промотора и сигнала терминации-полиаденилирования. Это обеспечивает эффективную экспрессию гена в трансформированных рас­тительных клетках;

Сайт инициации репликации (ori), который поз­воляет плазмиде реплицироваться в Е.со li . Некоторые векторы содержат также и сайт инициации репликации в A . tumefaciens ;

Правая фланкирующая последовательность Т-ДНК. Этот элемент абсолютно необходим для интеграции Т-ДНК в клеточную ДНК растений. Большинство же векторов содер­жат как правую, так и левую фланкирующие последовательности;

- полилинкер (множественный сайт клониро­вания) для встраивания гена в участок между границами Т-ДНК;

Поскольку клонирующие векторы не содер­жат генов vir, они сами не способны обеспечи­вать доставку и интеграцию Т-ДНК в клетки растения-хозяина. Чтобы решить эту пробле­му, было разработано два подхода. В первом случае используют бинарную векторную систе­му.

Бинарный клонирующий век­тор содержит сайты инициации репликации и для Е.со li , и для A . tumefaciens , но не несет генов vir, т. е. это практически челночный вектор Е.со li - A . tumefaciens . Все стадии клонирования проводят в Е.со li , а затем вектор вводят в A . tumefaciens . Штамм-реципиент A . tumefaciens несет модифицированную неонкогенную («разору­женную») Тi -плазмиду; она содержит полный набор vir-генов, но из нее удалена часть (или вся) Т-ДНК (так что Т-ДНК не может быть транспортирована). Продуцируя белки, кодируемые vir -генами, неонкогенная Тi-плазмида выступает в роли помощника , способствуя встраиванию Т-ДНК из бинарного клонирующего вектора в хромо­сомную ДНК растения.

Во втором случае используют коинтегративную векторную систему. Векторная ДНК рекомбинирует в A . tumefaciens с «разоруженной» Тi-плазмидой, Т-ДНК которой не несет опухолеродных генов, таким образом, что весь клонирующий вектор встраивается в неонкогенную Тi-плазмиду.

При конструировании векторных молекул должно быть предусмотрено наличие промоторов , работающих в растениях. Промотор (участок, к которому присоединяются РНК-полимеразы) должен обладать набором свойств, а именно: силой (активной экспрессией), возможностью регуляции, ткане- и органспецифической экспрессией. Так, например, к регулируемым промоторам относится промотор генов белков теплового шока (генов, активность которых индуцируется при повышенной температуре), а тканеспецифичная экспрессия характерна для генов, контролирующих синтез запасных белков, например зеина , который обнаружен только в тканях семян злаков. Наиболее популярным является промотор гена вируса мозаики цветной капусты (CAMV). Гены, подшитые к такому промотору, активно экспрессируются во всех тканях.

Наконец, в векторе должны быть предусмотрены маркеры, с помощью которых возможен отбор трансгенных растений. В литературе маркерные гены еще называют репортерными . Их достаточно много. Например, luxA и luxB - это гены, выделенные из ДНК светлячков. Они контролируют синтез люциферазы , которая обеспечивает переход люцеферинов из окисленной формы в основную, что и обеспечивает свечение. В последнее время пользуется популярностью другой репортерный ген – ген зелёного флуоресцирующего белка GFP (green fluorescent protein). Этот ген был выделен из ДНК медузы Acquorea victoria . Трансгенные растения с этим геном светятся в ультрафиолете зеленым светом.

Традиционный способ трансформации растительных клеток с помощью Т-ДНК заключается в нанесении агробактерий, содержащих Ti-плазмиду, на специально поврежденный побег. К сожалению, эта система доставки применима не для всех видов расте­ний. Эффективным методом доставки ДНК в различные растительные клетки является также бомбардировка микрочастицами золота или вольфрама с ДНК, нанесенной на их поверхность (биобаллистика , или биолистика ). Создан даже специальный дробовик – «Shotgun», который стреляет этими шариками.

Были также разработаны методы встраивания чужерод­ных генов непосредственно в хлоропластную или митохондриальную ДНК так, чтобы кодируемый белок синтезировался прямо в этих органеллах. И наконец, для того чтобы успокоить обществен­ность, были разработаны методы удаления мар­керных генов из трансгенных растений.

Перечень дополнительных работ, производимых при капитальном ремонте здания и объектов

1. Обследование зданий (включая сплошное обследование жилищного фонда) и изготовление проектно-сметной документации (независимо от периода проведения ремонтных работ).

2. Перепланировка квартир, не вызывающая изменение основных технико-экономических показателей здания, увеличение количества и качества услуг, оборудование в квартирах, кухонь и санитарных узлов; расширения жилой площади за счет подсобных помещений; улучшение инсоляции жилых помещений; ликвидация темных кухонь и входов в квартиры через кухни с устройством при необходимости встроенных или пристроенных помещений для лестничных клеток, санитарных узлов или кухонь, а также балконов, лоджий и эркеров; замена печного отопления центральным с устройством котельных, теплопроводов и тепловых пунктов; переоборудование печей для сжигания в них газа или угля; оборудование системами холодного и горячего водоснабжения, канализации, газоснабжения с присоединением к существующим магистральным сетям при расстоянии от ввода до точки подключения к магистралям до 150 мм; устройство газоходов, водоподкачек, бойлерных; установка бытовых электроплит взамен газовых плит или кухонных очагов; устройство лифтов, мусоропроводов, систем пневматического мусороудаления в домах с отметкой лестничной площадки верхнего этажа 14 м и выше; перевод существующей сети электроснабжения на повышенное напряжение; устройство теле- и радиоантенн коллективного пользования, подключение к телефонной и радиотрансляционной сетям; установка домофонов, электрических замков; устройство систем противопожарной автоматики и дымоудаления; автоматизация и диспетчеризация отопительных котельных, тепловых сетей, теплопунктов и инженерного оборудования жилых домов; благоустройство дворовых территорий (замощение, асфальтирование, озеленение, устройство ограждений, дровяных сараев); оборудование детских, спортивных (кроме стадионов) и хозяйственно-бытовых площадок; разборка аварийных домов; изменение конструкции крыш; оборудование чердачных помещений жилых и нежилых зданий под эксплуатируемые.

3. Замена существующего и установка нового технологического оборудования в зданиях коммунального и социально-культурного назначения.

4. Утепление и шумозащита зданий.

5. Замена изношенных элементов внутриквартальных инженерных сетей.

6. Ремонт встроенных помещений в зданиях.

7. Экспертиза проектно-сметной документации.

9. Технический надзор.

10. Проведение ремонтно-реставрационных работ памятников, находящихся под охраной государства.


Генетическую инженерию можно трактовать как искусство использовать знание основ и методов молекулярной генетики и молекулярной биологии для конструирования организмов с заданными наследственными свойствами.

Генная инженерия методами in vivo или in vitro решает задачи введения в геном реципиентной клетки одного или нескольких (обычно чужеродных) генов либо создания в геноме новых типов регуляторных связей. В таких случаях видовая принадлежность реципиентных организмов не меняется, но появляются несвойственные им признаки.

Среди направлений генной инженерии в растениеводстве можно выделить следующие:

1. Методы диагностики и отбора:

· растений, поражённых вирусами и бактериями;

· генотипов, устойчивых к стрессам и болезням;

· растений с различной цитоплазмой;

· растений с высоким уровнем гомеостатичности.

2. Методы улучшения:

· качества зерна;

· устойчивости к вредителям;

3. Создания молекулярно-генетической карты с целью повышения эффективности селекционных программ.

Своими успехами генетическая инженерия растений обязана в первую очередь достижениям клеточной инженерии в разработке методов регенерации целых растений из единичных дифференцированных клеток или протопластов. Второй слагающей успеха явилось использование природной системы трансформации растений Ti-плазмидами Agrobacterium tumefaciens и создания на их базе векторов, способных интегрироваться в растительные хромосомы. Это дало возможность вводить в клетки растений чужеродные гены и получать из единственной клетки сформированные растения. Такие организмы, в которых чужеродные гены обнаруживаются во всех его клетках, включая половые, называются трансгенными. Они обладают свойством передавать приобретённые или новые признаки своему потомству.

Успех в манипулировании генами достигнут главным образом в работах с двудольными растениями семейства Solanaceae, а модельными объектами является табак, томаты и петуния.

Прогресс в решении проблемы генетической трансформации растений при помощи экзогенной ДНК связан с решением трёх проблем:

1. создание удобной реципиентной системы;

2. выделение отдельных генов;

3. использование векторов.